Prodhimi dhe karakterizimi biokimik i lakazës NRC 620 të kërpudhës së ostrave dhe vlerësimi i efikasitetit të saj në sqarimin e lëngut të mollës.

Pas 25 ditësh inkubim statik në 28°C, lakaza nga *Pleurotus ostreatus* NRC620 tregoi aktivitetin më të lartë në mjedisin e kulturës kërpudhore. Vlerat optimale të pH-it dhe temperaturës për këtë enzimë ishin përkatësisht 3.0 dhe 70°C. Pas 2 orësh inkubim në 40°C dhe 50°C, aktiviteti i enzimës ruajti përkatësisht 68.33% dhe 59.61%. Pas 2 orësh inkubim në tampon citrat-fosfat (pH 7.0), aktiviteti i enzimës mbeti në 100%. Shtimi i 10 mM MgSO₄ dhe CuSO₄ rriti aktivitetin e enzimës me afërsisht 21% dhe 35%, përkatësisht, ndërsa NaCl, MnCl₂, KCl dhe CaCl₂ penguan aktivitetin enzimatik. Duke përdorur ABTS si substrat, parametrat kinetikë (Km dhe Vmax) të lakazës *Pleurotus ostreatus* NRC 620 ishin përkatësisht 1.99 mM dhe 16,217 μmol min−1 L−1. Trajtimi enzimatik i mostrave të lëngut të mollës uli ndjeshëm si pH-in ashtu edhe viskozitetin, dhe ky reduktim korrelonte me një rritje të kohës së ruajtjes. Trajtimi i lakazës rezultoi në një ulje të lehtë të përmbajtjes totale fenolike të lëngut të mollës, por nuk u vu re asnjë reduktim i aktivitetit antioksidues.
Në vitet e fundit, studiuesit janë përqendruar në zbatimin e bioteknologjisë së gjelbër në industrinë ushqimore. Lakaza është një nga enzimat më të dobishme në industrinë ushqimore, duke gjetur zbatime në fusha të tilla si përpunimi i lëngjeve, pjekja, stabilizimi i verës dhe përmirësimi i cilësive organoleptike të produkteve ushqimore.¹Shumë bimë dhe mikroorganizma të lartë sekretojnë lakazë,²dhe kërpudhat si deuteromicetet, askomicetet dhe bazidiomicetet gjithashtu mund të prodhojnë lakazë.³Lakaza (EC 1.10.3.2) është një oksidazë blu që redukton oksigjenin molekular në ujë duke përdorur një sistem të përbërë nga tre atome të ndryshme bakri, duke oksiduar kështu komponime të ndryshme fenolike dhe amina aromatike. Gjatë prodhimit të lëngjeve të frutave dhe perimeve, nxirja enzimatike dhe joenzimatike janë çështje kritike.⁴Meqenëse këto substanca ndikojnë negativisht në ngjyrën, shijen dhe aromën e lëngut, ato duhet të hiqen.⁵
Nga të gjitha frutat, mollët janë më të konsumuarat në mbarë botën dhe në Bashkimin Evropian. Në vitin 2019, prodhimi i mollëve u rendit i treti në nivel global, duke tejkaluar 87 milionë ton.⁶Mollët përmbajnë komponime të shumta fenolike, duke përfshirë flavonoidet dhe acidet fenolike si acidi kafeik dhe acidi klorogjenik.⁷Meqenëse lëngu i mollës zakonisht konsumohet në formën e tij të kthjellët, afërsisht 50% deri në 90% të përbërësve fenolikë humbasin gjatë procesit të filtrimit.⁸Sot, konsumatorët kanë tendencë të zgjedhin produkte të përpunuara minimalisht, siç është lëngu i mollës me turbullira me përmbajtje të lartë polifenolesh. Megjithatë, për shkak të përmbajtjes së lartë fenolike, ky lloj lëngu molle është veçanërisht i ndjeshëm ndaj njollosjes dhe errësimit.⁹Teknologji të ndryshme, duke përfshirë metodat e trajtimit me nxehtësi si pasterizimi në 60–90°C, përdoren për të zvogëluar ose parandaluar errësimin e lëngut të mollës.¹⁰Megjithatë, sipas hulumtimit të Sauceda-Gálvez¹¹, përpunimi termik mund të shkatërrojë kimikatet e paqëndrueshme dhe të ndikojë në cilësitë organoleptike të lëngut të mollës. Alternativat ndaj metodave të përpunimit termik përfshijnë dioksidin e karbonit superkritik, rrezatimin ultravjollcë, ultratingujt, presionin e lartë hidrostatik ose homogjenizimin me presion të lartë.¹²Efikasiteti i këtyre teknologjive dhe rendimenti i lëngjeve të frutave të përshtatshme varen nga parametrat e përdorur dhe karakteristikat e produktit. Përdorimi i tyre i gjerë është i kufizuar nga kostot e larta, efektet negative në cilësinë e disa produkteve ushqimore ose inaktivizimi i pamjaftueshëm i enzimave.^13,14
Lakaza mund të përdoret për të stabilizuar dhe sqaruar lëngun e frutave.¹⁵Gökmen etj.¹⁶rekomandojnë përdorimin e lakazës për sqarimin e lëngut të frutave sepse ajo largon në mënyrë efektive komponimet fenolike duke i shndërruar ato në polimere ose oligomere që hiqen lehtësisht nga çdo membranë ultrafiltrimi, duke lejuar që lëngu i mollës të ruajë ngjyrë dhe kthjelltësi të qëndrueshme deri në gjashtë javë në 50°C. Lakaza *Trichoderma* e pastruar u imobilizua në sfera alumini dhe u përdor për të hequr në mënyrë selektive komponimet e pakëndshme të shkaktuara nga kontaminimi mikrobik i lëngut të mollës.¹⁷
Përafërsisht 80-90% e përbërësve të paqëndrueshëm të lëngut të mollës janë estere dhe aldehide, të cilat i japin lëngut një aromë unike.¹⁸Lakaza nga *Trametes versicolor* u imobilizua në një mbështetëse të lirë të bërë nga fibra natyrale nga lëvozhgat e reja të kokosit për sqarimin e lëngut të mollës.¹⁹Studimet e mëparshme kanë hetuar stabilizimin e lëngut të mollës (ngjyrën dhe turbullirën) duke përdorur metoda pa enzima ose imobilizim, ose në kombinim me ultrafiltrimin.^5,19Megjithatë, efekti i lakazave kërpudhore në vetitë fiziko-kimike të lëngut të mollës gjatë ruajtjes mbetet i paqartë. Prandaj, qëllimi i këtij studimi ishte të hetonte eksperimentalisht ndryshimet në vetitë fiziko-kimike, përmbajtjen e komponimeve fenolike dhe aktivitetin antioksidues të lëngut të mollës pas trajtimit me lakaza kërpudhore dhe ruajtjes dyjavore në frigorifer. Lakazat kanë aftësinë të oksidojnë komponimet fenolike, gjë që i bën ato premtuese për përdorim në procese të ndryshme industriale, duke përfshirë edhe sqarimin e lëngut. Ky studim shqyrtoi lakazat nga *Pleurotus ostreatus* NRC 620, duke u përqendruar në kushtet ideale për aktivitetin dhe efektivitetin e tyre në sqarimin e lëngut. Ndërsa kërkimi mbi kërpudhat e detit (P. ostreatus NRC 620) është ende i kufizuar, studimet e mëparshme kanë shqyrtuar enzima nga burime të ndryshme kërpudhore, të tilla si Trametes versicolor dhe Ganoderma lucidum. Qëllimi i këtij studimi ishte të vlerësonte zbatimin e mundshëm të kësaj enzime në industrinë ushqimore dhe të nxirrte në pah vetitë e saj unike, veçanërisht pH dhe temperaturën e saj ideale.
2,2′-Azooksibis(acidi 3-etilbenzotiazolin-6-sulfonik) (ABTS) u ble nga Sigma-Aldrich (Kanada). Të gjithë reagentët e tjerë ishin të gradës analitike.
Qendra e Koleksionimit të Kulturave Mikrobike e Qendrës Kombëtare të Kërkimit mori llojin e njohur të kërpudhës oyster NRC620. Pas subkulturës, ky lloj u ruajt në pllaka agar dekstroze patateje në 4°C. Metoda e përgatitjes së inokulumit ishte si më poshtë: Miceli 10-ditor, plotësisht i zhvilluar, u inokulua në pllaka agar dekstroze patateje dhe u inkubua në 28°C. Pas 10 ditësh, tre blloqe miceliale me diametër 12 mm u hoqën nga mjedisi i agarit duke përdorur një shpues metalik steril dhe u vendosën në shishe Erlenmeyer 250 mL me tapa pambuku që përmbanin 50 mL mjedis kulture të sterilizuar (pH 5.0, siç është përshkruar më parë nga Othman et al.²⁰Kulturat u inkubuan në 28°C për 18 ditë. Kulturat më pas u filtruan përmes letrës filtruese Whatman Nr. 1 dhe supernatanti që rezultoi shërbeu si burim enzime.
Aktiviteti i lakkazës u përcaktua duke përdorur ABTS si substrat. Përzierja e reagimit (2 mL) përmbante 500 μL ABTS 0.3 mM (të tretur në tampon citrat natriumi 0.1 M, pH 4.5) dhe sasinë e kërkuar të mostrës enzimë të holluar me ujë të distiluar.^21,22Duke pasur parasysh që lakaza mund të oksidojë ABTS në temperaturën e dhomës (28 °C ± 2), oksidimi i ABTS u përcaktua duke matur rritjen e absorbimit në 420 nm (ε₄₂₀= 36,000 cm^-1 M ^-1) duke përdorur një spektrofotometër UV Agilent Carry-100. Një njësi e aktivitetit të lakkazës u kërkua për të oksiduar 1 μmol ABTS në minutë. Përqendrimi i proteinave u përcaktua me metodën Bradford duke përdorur albuminën e serumit të gjedhit si kontroll të brendshëm.^23,24
Pas marrjes së enzimës nga lloji i kërpudhës oyster NRC 620, aktiviteti i saj u mat në intervale të ndryshme kultivimi për 25 ditë në kushte statike në 28 °C.
Për të studiuar efektin e temperaturës në aktivitetin e lakazës, u kryen eksperimente në diapazonin e temperaturës nga 20 deri në 90 °C. Përpara shtimit të enzimës dhe fillimit të reaksionit, tamponi (0.1 M citrat natriumi, pH 4.5) dhe substrati (ABTS) u përzien dhe u inkubuan për 5 minuta në temperatura të ndryshme. Stabiliteti termik i enzimës u vlerësua me anë të inkubimit në tampon 0.05 M fosfat natriumi (pH 7.0) në 40, 50, 60 dhe 70 °C për 2 orë, përkatësisht. Aktiviteti i mbetur u vlerësua më pas duke përdorur substratin ABTS.
Efekti i pH-it në aktivitetin e lakazës u vlerësua duke përdorur ABTS si substrat në tampona citrat-fosfat 0.1 M me një diapazon pH-i nga 2.5 deri në 7.0. Tretësira enzimatike u inkubua në 40°C për dy orë në tampona citrat 0.1 M dhe Tris (pH 3, 4, 6 dhe 7) për të vlerësuar stabilitetin e pH-it. Aktiviteti i mbetur me ABTS si substrat u llogarit pas inkubimit.
Lakaza u inkubua për 10 minuta në tampon fosfati natriumi (0.05 M, pH 7.0) që përmbante jone të ndryshme metalike (Mg2+, Cu2+, Co2+, Ca2+, Zn2+, K+, Na+ dhe Mn2+) në përqendrime prej 2.5 mM dhe 10 mM, përkatësisht. Substrati (ABTS) u shtua më pas për të filluar reaksionin dhe u vlerësua aktiviteti relativ.
Oksidimi i ABTS nga lakaza në përqendrime të ndryshme (0.025–3 mM) u mat në pH 4.5 për të përcaktuar parametrat kinetikë (Vmax dhe Km).^konstantetë ekuacionit Michaelis-Menten u llogaritën duke përdorur një grafik Lineweaver-Burk, i cili paraqet reciprocitetin e shpejtësisë së reagimit si një funksion të përqendrimit të substratit. Konstantet kinetike u llogaritën nga grafiku Lineweaver-Burk duke përdorur softuerin GraphPad Prism versioni 6.01.
Pasi mollët u lanë plotësisht me ujë çezme, ato u prenë përgjysmë dhe u shtrydhën duke përdorur një shtrydhëse molle plotësisht automatike Braun MP80 (prodhuar në Gjermani). Lëngu u filtrua përmes katër shtresave nape. Grupit të kontrollit nuk iu shtuan enzima, ndërsa 2.0% lakazë (përqendrimi më efektiv i testuar) iu shtua lëngut të sapo përgatitur të mollës, i cili më pas u ruajt në 4°C për dy javë.
Aciditeti i titrueshëm (TA) dhe pH u përcaktuan sipas metodës së Boulton et al.^al.27pH-i i secilës mostër u mat duke përdorur një pH-metër dixhital (pH-metër JENWAY 3510). Aciditeti i titrueshëm (TA) u llogarit bazuar në acidin malik duke përdorur formulën e mëposhtme.
Ku V dhe C janë përkatësisht vëllimi (mL) dhe përqendrimi (0.1 mol/L) i tretësirës së hidroksidit të natriumit të përdorur në titrim. K është koeficienti i konvertimit të acidit malik, i barabartë me 0.067, dhe W është masa (g) e lëngut të mollës.
Lëndët e ngurta totale të tretshme (^TDSPërmbajtja () e të gjitha mostrave të lëngut u përcaktua duke përdorur një refraktometër xhepi PAL-1 (ATAGO, Tokio, Japoni). Pas çdo matjeje, lentet optike u shpëlanë me ujë të deionizuar dhe çdo mostër lëngu molle u testua tre herë. Vlera për secilën mostër u llogarit duke mesatarizuar tre matjet. Mesatarja ± devijimi standard për secilën mostër lëngu molle u llogarit gjithashtu duke mesatarizuar këto rezultate.
Viskoelasticiteti i mostrave të lëngut të mollës u vlerësua duke përdorur një viskozimetër rrotullues (RV, Rheotest 2, Gjermani). Mostra u vendos brenda cilindrit "S2" të viskozitetit. Viskoziteti i dukshëm u përfaqësua nga pjerrësia e kurbës së stresit të prerjes kundrejt shpejtësisë së prerjes, e cila u llogarit nga stresi i prerjes dhe kurbat përkatëse në shpejtësi të ndryshme të prerjes (nga 1.00 në 437.4 s⁻¹). Formula për llogaritjen e viskozitetit të dukshëm është si më poshtë:
Ku η është viskoziteti i dukshëm (cP), τ është stresi i prerjes (din/cm²), γ është shpejtësia e prerjes (sec⁻¹), dhe (τ) llogaritet duke përdorur vlerat e momentit rrotullues (α) dhe cilindrit (Z) duke përdorur formulën e mëposhtme: τ = Z . α.
Indeksi i ngjyrosjes u përcaktua sipas metodës së Meidav ​​​​et al.^al.29Një mostër lëngu prej 10 ml u centrifugua në 2750 xg për 10 minuta. 5 ml të supernatantit të lëngut u përzien me 5 ml etanol 95%. Absorbimi i përzierjes u mat në 420 nm duke përdorur një spektrofotometër Shimadzu UV (UV-1601 PC).
Përmbajtja totale fenolike (TPC) u përcaktua kolorimetrikisht duke përdorur reagentin Folin-Ciocalteu siç përshkruhet nga Boulton et al.^[27]]. Një kurbë standarde e acidit galik u ndërtua për përqendrime nga 0 deri në 500 mg/L (^r²= 0.997). Rezultatet shprehen si ekuivalentë të acidit galik (mg GAE/mL).
Shtoni 125 μL ujë të distiluar dhe 2850 μL tretësirë ​​FRAP në 25 μL lëng molle dhe lëreni përzierjen në errësirë ​​për³⁰min. Pastaj matni absorbimin në 593 nm duke përdorur një spektrofotometër Shimadzu UV (UV-1601 PC). Reagenti FRAP u përgatit duke përzier 300 mM tampon acetati (pH 3.6), 20 mM klorur hekuri(III) dhe 10 mM 2,4,6-tris(2-piridil)triazinë (TPTZ) (të tretur në 40 mM HCl) në një raport prej 10:1:1. Një kurbë standarde u gjenerua duke përdorur Trolox si standard (^R²= 0.999), dhe rezultatet shprehen si μM Trolox/mL.
Aktiviteti antioksidues i lëngjeve të trajtuara dhe të patrajtuara u përcaktua duke përdorur metodën DPPH për të vlerësuar aftësinë e tyre për të pastruar radikalet e lira të DPPH.³¹Dhjetë mikrolitra lëng u përzien me 1 ml të një tretësire DPPH (100 μM) në metanol. Pas reagimit në errësirë ​​për 30 minuta, absorbimi i përzierjes u mat në 517 nm duke përdorur një spektrofotometër Shimadzu UV (UV-1601 PC). Rezultatet u shprehën si ekuivalentë trolox (μM trolox/ml) bazuar në një kurbë kalibrimi (_^R2= 0.990).
Të dhënat e marra treguan se prodhimi maksimal i lakazës u vu re në kërpudhat NRC 620 të ostrave deri në fund të ditës së 18-të të fermentimit, duke arritur një aktivitet prej 1302 U/L. Kjo shërbeu si bazë për përcaktimin e kohës optimale të kultivimit për prodhimin e lakazës (Figura 1). Megjithëse prodhimi i enzimave u rrit me rritjen e kohës së kultivimit, shkalla e rritjes nuk ishte drejtpërdrejt proporcionale me kohën e kultivimit; pas 21 ditësh, aktiviteti i enzimës ishte rritur vetëm me 90 U/L (në 1390 U/L). Prandaj, 18 ditë u zgjodhën përfundimisht si koha optimale e kultivimit për të balancuar rendimentin e produktit me përfitimet ekonomike të kohës së rritur të kultivimit.
Efekti i kohës së kultivimit në rendimentin e lakazës në Pleurotus ostreatus NRC 620. Tre blloqe miceliale kërpudhore (12 mm) u inokuluan në 50 ml medium steril dhe më pas u kultivuan në 28 °C për kohë të ndryshme.
Në përputhje me studime të tjera, rezultatet tona tregojnë se periudha ideale e kultivimit për të arritur sekretimin maksimal të lakkazës nga kërpudhat ka të ngjarë të jetë midis 7 dhe 36 ditëve.³²Sipas Ezike et al.³³, *Trametes polyzona* WRF03 prodhoi sasinë më të lartë të lakazës deri në fund të ditës së nëntë të fermentimit, me një aktivitet specifik prej 1637 U/mg proteinë. Për më tepër, Othman et al.³⁴zbuloi se *Trichoderma harzianum* S7113 sekretoi një sasi të madhe lakaze në ditën e pestë të kulturës. Shkalla e prodhimit të lakazës arriti një aktivitet maksimal në ditën e katërmbëdhjetë dhe më pas u ul gradualisht.³⁴Edhe pse sekretimi i enzimave mund të ndodhë edhe gjatë fazës kryesore të rritjes, ai zakonisht arrin kulmin gjatë fazës së ndërmjetme dhe shkaktohet nga konsumi i një burimi karboni ose azoti.^34,35
Edhe pse lakaza nga Pleurotus ostreatus NRC 620 shfaqi aktivitet të lartë në një gamë të gjerë temperaturash nga 50°C në 80°C, duke iu afruar aktivitetit maksimal (69–98%), aktiviteti i saj maksimal u vu re në 70°C (Fig. 2a). Jashtë këtij diapazoni të temperaturës, aktiviteti i enzimës u ul në afërsisht 70°C. Këto rezultate sugjerojnë që enzima është aktive në temperatura të larta, ndoshta sepse temperatura e lartë rrit energjinë kinetike të reaksionit.
Efekti i temperaturës së reaksionit (a) dhe pH-it (b) në aktivitetin e lakazës në *Pleurotus ostreatus* NRC 620. Temperaturat që varionin nga 20 deri në 90 °C u arritën duke e para-inkubuar përzierjen në temperatura të ndryshme për 5 minuta para se të shtohej enzima dhe të fillonte reaksioni. Efekti i pH-it në aktivitetin e lakazës u vlerësua duke përdorur ABTS si substrat në tretësira që përmbanin tampon citrat-fosfat 0.1 M në një diapazon pH prej 2.5 deri në 7.0.
Sipas Ezike et al.^al.33, temperatura optimale për lakazën *Trametes polyzona* WRF03 është 55 °C, e cila është e njëjtë me atë për *Ganoderma lucidum*^laccase36dhe e ngjashme me temperaturën optimale (50 °C) për *Trametes polyzona* KU-RNW02737^lakkazë . ^Baldrian38vëren se, ashtu si për sistemet e tjera enzimatike që zbërthejnë ligninën, diapazoni ideal i temperaturës për lakazën është midis 50 dhe 70 °C.
Rezultatet treguan se enzima shfaqi aktivitetin më të lartë në pH 3.0, duke arritur 94% aktivitet në pH 3.5. Megjithatë, ajo mbeti aktive në një gamë të gjerë pH nga 2.5 në 7.0 (Figura 2b). Për më tepër, ajo shfaqi aktivitet më të lartë në kushte acidike krahasuar me kushtet neutrale ose alkaline. Aktiviteti i saj mbeti të paktën 77% mbi gamën e pH nga 2.5 në 4.5, por arriti vetëm afërsisht 38% në pH 7.0. pH optimal për lakazën nga *Trametes polyzona* WRF03 ishte 4.533, që është i njëjtë me pH për lakazat nga *Trametes polyzona* KU-RNW02737, *Trichoderma harzanium* 39, *Pleurotus* sp. 40 dhe *Trametes hirsuta* 41. Megjithatë, sipas studimit nga Chairin et al.⁴², pH optimal për lakazën nga *Polymorpha f. sp.* WR710-1 është 2.2, ndërsa pH optimal për lakazën nga *Polymorpha f. sp.* IBL-04 është 5.043. Lidhja e anioneve hidroksid (frenues i lakazës) me atomet e bakrit të lakazës T2/T3 mund të jetë arsyeja për aktivitetin e zvogëluar të lakazës në kushte pH neutrale ose alkaline. Kjo mund të prishë transferimin e brendshëm të elektroneve nga qendra T1 në qendrën T2/T3, duke shkaktuar kështu...^kufizuesaktiviteti i enzimës23,44
Duke inkubuar enzimën në temperatura të ndryshme, u zbulua se si koha e inkubacionit ashtu edhe temperatura ndikuan në stabilitetin e enzimës. Veçanërisht, lakaza nga *Trametes polyzona* NRC 620 shfaqi stabilitet më të lartë në 40℃ dhe 50℃, duke ruajtur përkatësisht 68.33% dhe 59.61% të aktivitetit të saj fillestar pas 120 minutash (Figura 3a). Në të kundërt, në të njëjtat kushte (40℃ dhe 50℃, 120 minuta), lakaza nga *Trametes polyzona* WRF03 ruajti përkatësisht 64.38% dhe 42.92% të aktivitetit të saj.³³Përkundrazi, rritja e kohës së inkubacionit dhe temperaturës uli stabilitetin e lakazës *Trametes polyzona* NRC 620; Pas inkubimit në 60℃ dhe 70℃ për 60 minuta, aktiviteti i saj u ul në 39.24% dhe 1.72%, përkatësisht (Figura 3a). Në përputhje me rezultatet eksperimentale, lakaza nga *Trametes polyzona* WRF03 tregoi stabilitet më të lartë në 40 dhe 50℃ gjatë gjithë procesit të trajtimit termik.³³Në mënyrë të ngjashme, Lueangjaroenkit et al.^al.37dhe Chairin etj.^al.42raportoi stabilitetin e lakazave nga Trametes polyzona KURNW027 dhe Trametes polyzona WR710-1 në 50 °C për 1 orë, përkatësisht. Si një biokatalizator i dobishëm i zbatueshëm në fusha të ndryshme bioteknologjike, lakaza duhet të ketë stabilitet dhe performancë të mirë në një gamë të gjerë temperaturash.
Stabiliteti termostatik (a) dhe stabiliteti i pH-it (b) i lakazës nga *Pleurotus ostreatus* NRC 620. Stabiliteti termostatik u vlerësua duke inkubuar tretësirën e enzimës në tampon fosfati natriumi 0.05 M (pH 7.0) në 40, 50, 60 dhe 70 °C për 2 orë, përkatësisht. Stabiliteti i pH-it u vlerësua duke inkubuar tretësirën e enzimës në tampon citrat 0.1 M dhe tampon Tris (pH 3, 4, 6 dhe 7) në 40 °C për 2 orë. Aktiviteti i mbetur u llogarit duke përdorur ABTS si substrat pas inkubimit.
Për të përcaktuar kushtet optimale për përdorimin dhe ruajtjen e enzimave, ne hetuam efektin e pH-it në stabilitetin e lakazës. Ekspozimi ndaj vlerave të ndryshme të pH-it ndikoi ndjeshëm në stabilitetin e strukturës së proteinave, duke ndikuar kështu në stabilitetin dhe aktivitetin e molekulës së enzimës. Rezultatet treguan se enzima ishte më pak e qëndrueshme në kushte acidike, ndërsa tregoi stabilitet më të mirë në vlera më të larta të pH-it (rajone neutrale dhe alkaline). Në vlerat e pH-it prej 7.0, 6.0, 4.0 dhe 3.0, shkallët e mbajtjes së enzimës pas 120 minutash ishin afërsisht 100%, 62.54%, 52.39% dhe 11.14%, përkatësisht (Fig. 3b). Lakaza *Strombus multisus* WRF03 tregoi stabilitet më të lartë në vlerat neutrale të pH-it (5.5–6.5) dhe stabilitet më të ulët në vlerat acidike të pH-it (nën 4.0). Pas 120 minutash në vlerat e pH prej 5.5, 6.0 dhe 6.5, shkallët e mbajtjes së enzimave ishin përkatësisht afërsisht 82%, 100% dhe 93%.³³Khairin etj.⁴²vunë re se lakaza nga Trametes polyzona WR710-1 ishte e qëndrueshme në diapazonin e pH-it nga 6.0 në 7.0, ndërsa Sayed et al.⁴⁵tregoi se lakaza ishte më e qëndrueshme në kushte pH neutrale. Megjithatë, lakaza nga Cerrena unicolor shfaqi gjithashtu stabilitet në kushte alkaline (pH 9.0)⁴⁶Lakazat e studiuara treguan stabilitet të lartë në një gamë të gjerë pH-i. Kjo mund të jetë një karakteristikë e rëndësishme për aplikimet industriale.
Meqenëse disa jone metalike kanë efekte si stimuluese ashtu edhe frenuese në aktivitetin enzimatik, efektet e tyre në aktivitetin enzimatik duhet të merren në konsideratë në aplikimet industriale. Kjo është thelbësore sepse jonet metalike janë ndotës të zakonshëm mjedisorë që mund të ndikojnë në stabilitetin dhe sintezën e enzimave jashtëqelizore.⁴⁷Për të hetuar efektet e joneve të shumë metaleve në lakazë nga *Pleurotus ostreatus* NRC 620, ne kryem eksperimente përkatëse. Siç tregohet në Figurën 4, varësisht nga lloji i metalit të përdorur, rritja e përqendrimit të jonit metalik nga 2.5 mM në 10 mM ndikoi negativisht në funksionin e enzimës. Për shembull,^Mg²⁺ , ^Co²⁺ , ^Zn²⁺, dhe^Cu²⁺mund të stimulojë dhe aktivizojë aktivitetin enzimatik, ndërsa^Na⁺ , ^Mn²⁺ , ^Ca²⁺, dhe^K⁺mund të pengonte aktivitetin enzimatik. Në një përqendrim prej 10 mM, jonet Cu²⁺ dhe Mg²⁺ ishin aktivizuesit më të fuqishëm të aktivitetit të lakazës nga *Pleurotus ostreatus* NRC 620, duke siguruar një shkallë aktivizimi prej afërsisht 34% dhe 20%, përkatësisht. Megjithatë, në një përqendrim prej 10 mM, jonet Ca²⁺ ishin frenuesi më i fuqishëm i lakazës, duke ulur aktivitetin enzimatik me afërsisht 60%.
Efekti i joneve metalike në aktivitetin e lakazës Pleurotus ostreatus NRC 620. Lakaza u inkubua për 10 minuta në tampon fosfati natriumi (0.05 M, pH 7.0) që përmbante jone të ndryshme metalike në përqendrime prej 2.5 mM dhe 10 mM. Reaksioni më pas filloi me shtimin e substratit (ABTS), pas të cilit u mat aktiviteti relativ.
Rezultatet tona janë në përputhje me ato të autorëve të tjerë të cilët zbuluan se Mg²⁺ dhe Cu²⁺ rrisin aktivitetin e *Trametes polyzona* WRF03³. Castaño et al.⁴⁸ zbuluan se lakaza nga *Xylaria* sp. stimulohet në një farë mase nga jonet e bakrit (Cu²⁺). Për më tepër, Foroutanfar et al.⁴⁹ dhe Si et al.⁵⁰ kryen studime të ngjashme mbi lakazat nga *Paraconiothyrium variabile* dhe *Trametes pubescens*, përkatësisht. Vendi i lidhjes së bakrit të tipit II (T2) i kësaj enzime mund të ngopet me Cu²⁺ në një përqendrim të caktuar, gjë që mund të shpjegojë stimulimin e aktivitetit të lakazës në përqendrime më të larta të Cu²⁺⁳⁹. Meqenëse lakazat e kërpudhave të kalbjes së bardhë janë oksidaza që përmbajnë atome të shumëfishta bakri, efektet e joneve të bakrit në aktivitetin e lakazës janë të ndryshme dhe variojnë nga stimuluese dhe frenuese në neutrale.⁵¹ Në të kundërt, Zhou et al.^[52]raportoi se^Cu²⁺pengoi aktivitetin e lakkazës së termitit nëntokësor të Tajvanit (Odontotermes formosanus). Megjithatë, lakkazat e Cerena sp. HYB07^[53]dhe Clitocybe maxima^[54]nuk u prekën nga jonet e bakrit.
Specifikiteti i substratit u përfaqësua nga parametrat e tij kinetikë (Km dhe Vmax); sa më i fortë të ishte afiniteti i lidhjes së substratit me enzimën, aq më e ulët ishte vlera e Km dhe aq më e lartë ishte specifikiteti i substratit.^3,21,55Parametrat kinetikë (Km dhe Vmax) të lakazës nga *Pleurotus ostreatus* NRC 620 u përcaktuan duke përdorur programin GraphPad Prism 6.0 duke paraqitur grafikun Lineweaver-Burk (Figura 5). Kur u përdor ABTS si substrat, rezultatet ishin 1.99 mM dhe 16217 μmol.^{min⁻¹ L⁻¹,}përkatësisht. Elsayed et al.²¹raportoi se vlerat Km për oksidimin e ABTS ishin përkatësisht 0.1 mM dhe 0.064 mM, duke treguar një afinitet të lartë të izoenzimave Lac A dhe Lac B për ABTS. Për më tepër, vlerat Vmax ishin 0.182 μmol.^min⁻¹dhe 0.603 μmol^min⁻¹, përkatësisht. Vlera e përftuar e Km ishte më e ulët se ajo e Trametes polyzona WRF03 (8.66 mM); për më tepër, vlera e tyre Vmax (1429 mmol min⁻¹) ishte gjithashtu^{më i ulët}kur përdoret ABTS si substrat.33 Në mënyrë të ngjashme, vlerat Km të përqendrimeve të lakazës Lentinus squarrosulus MR13 dhe Trametes sp. AH28-2 ishin përkatësisht 0.0714 mM dhe 0.025 mM, dhe vlerat Vmax ishin 0.0091 mM min−1 dhe 0.67 mM min−1 mg−1 (në krahasim me ABTS)^{, përkatësisht.56,57}
U hetua efekti i përqendrimit të ABTS në aktivitetin e lakazës nga *Pleurotus ostreatus* NRC 620 dhe u paraqit një grafik Lineweaver-Burk i reciprocitetit të shpejtësisë fillestare të reagimit kundrejt përqendrimit të ABTS. Reaksioni i oksidimit të ABTS me përqendrime të ndryshme (0.025–3.0 mM) të lakazës u mat në pH 4.5 për të përcaktuar parametrat kinetikë (Vmax dhe Km). Konstantet kinetike Michaelis-Menten u llogaritën duke përdorur grafikun Lineweaver-Burk të reciprocitetit të shpejtësisë së reagimit kundrejt përqendrimit të substratit. Konstantet kinetike u llogaritën nga grafiku Lineweaver-Burk duke përdorur programin GraphPad Prism 6.01.
Enzimat tradicionale sqaruese, të tilla si pektinazat, hidrolizojnë substancat pektike, duke zvogëluar viskozitetin dhe turbullirën. Ato zbërthejnë në mënyrë efektive polisakaridet strukturore dhe shpesh përdoren në kombinim me enzima të tjera, të tilla si celulazat dhe hemicelulat, për të përmirësuar rendimentin dhe kthjelltësinë. Megjithatë, pektinazat nuk synojnë posaçërisht komponimet fenolike, të cilat janë kontribuesit kryesorë në turbullirë dhe ngjyrë kafe oksidative, veçanërisht në lëngje të tilla si lëngu i mollës dhe rrushit.⁵⁸Në të kundërt, lakkazat katalizojnë oksidimin e komponimeve fenolike, duke i polimerizuar ato në molekula më të mëdha dhe të patretshme që mund të hiqen me sedimentim ose filtrim. Ky mekanizëm jo vetëm që përmirëson kthjelltësinë, por edhe zgjat afatin e ruajtjes së lëngut duke zvogëluar mundësinë e nxirjes oksidative të shkaktuar nga komponimet fenolike. Për më tepër, proceset e sqarimit të bazuara në lakkazë mund të kryhen në kushte të buta përpunimi (pH 3.5–5.5, temperatura 25–40 °C), duke i bërë ato të përshtatshme për lëngje delikate pa kompromentuar vetitë e tyre ushqyese ose organoleptike.⁵⁹Studimet kanë treguar se trajtimi me pektinazë mund ta qartësojë lëngun në 1-2 orë, ndërsa trajtimi me lakazë zakonisht kërkon një kohë reagimi më të gjatë (3-6 orë) për të reduktuar plotësisht komponimet fenolike. Megjithatë, ky proces mund të optimizohet duke imobilizuar enzimën ose duke kombinuar lakazën me metodat mekanike të sqarimit.⁶⁰Në këtë studim, profilizimi enzimatik i ekstraktit të papërpunuar zbuloi aktivitete të rëndësishme të lakazës dhe α-amilazës, ndërsa aktivitetet e pektinazës dhe ksilanazës ishin jashtëzakonisht të ulëta, dhe aktiviteti i celulazës nuk u zbulua. Prandaj, ulja e turbullirës dhe përmbajtjes fenolike ishte kryesisht për shkak të veprimit të lakazës, ndërsa ndryshimi në viskozitet mund të jetë pjesërisht për shkak të veprimit të amilazës.
Tabela 1 tregon parametrat fiziko-kimikë të lëngut të mollës së shtrydhur fllad dhe mostrave të trajtuara me lakazë. Rezultatet treguan se rendimenti i lëngut të mollës së shtrydhur fllad (71.59%) ishte më i ulët se ai i mostrave të trajtuara me lakazë (87.34%). Këto rezultate janë në përputhje me gjetjet e Pilnik dhe Orange.⁶¹, të cilët treguan se përdorimi i enzimave në përpunimin e frutave mund të rrisë rendimentin e lëngut, të përmirësojë filtrimin dhe të marrë lëng të pastër dhe me cilësi të lartë për përqendrim. Rritja e rendimentit të lëngut është kryesisht për shkak të rritjes së përmbajtjes së sheqernave të tretshëm në lëng. Gjatë hidrolizës enzimatike të frutave, mezoglea dhe pektina në muret qelizore të produktit shkatërrohen dhe shndërrohen në substanca të tretshme siç janë sheqernat dhe acidet neutrale.^62.Vlera e pH-it të lëngut të mollës së trajtuar me enzima ishte dukshëm më e ulët se ajo e grupit të kontrollit (P < 0.05), dhe vlera e pH-it e të dy grupeve u rrit ndjeshëm gjatë ruajtjes (Tabela 1). Këto rezultate janë në përputhje me ato të Mark et al.⁶³, i cili vuri në dukje se pH i lëngut të frutave të kajuxhit u ul pas ruajtjes pas trajtimit termik. Degradimi i pektinës dhe formimi i acidit galakturonik pas trajtimit enzimatik mund të jenë përgjegjës për rritjen e pH gjatë ruajtjes. pH i mostrave të trajtuara me enzima mbeti midis 4.05 dhe 4.31 gjatë gjithë ruajtjes, ndërsa pH i lëngut të mollës së patrajtuar varionte midis 4.12 dhe 4.33.
Aciditeti total (TA) i mostrave të patrajtuara dhe të trajtuara me lakkazë tregoi një tendencë në rënie me rritjen e kohës së ruajtjes (Tabela 1). Ulja e aciditetit iu atribuua shndërrimit të acideve organike në karbohidrate ose reaksioneve enzimatike, si dhe oksidimit gjatë ruajtjes së lëngut.⁶⁴Aciditeti total i lëngut të mollës së kontrollit dhe mostrave të trajtuara me enzima ishte më i ulët se ai i lëngjeve të tjera (lëng luleshtrydheje 0.9%, lëng kumbulle 2.2%, lëng kumquat 1.0%, lëng kajsie 2.4%, lëng portokalli 0.8%), por i ngjashëm me atë të lëngjeve të tjera (p.sh., lëng dardhe 0.3%).⁶²Këto ndryshime në lëngun e mollës së shtrydhur fllad të patrajtuar mund të jenë për shkak të faktorëve të ndryshëm, siç janë kushtet e rritjes, faktorët gjenetikë, niveli i pjekurisë dhe metodat e përpunimit.⁶⁵Ulja e aciditetit total të lëngut të mollës së kontrollit dhe të trajtuar me lakazë është në përputhje me rezultatet e paraqitura nga Singh et al.⁶⁶në lidhje me uljen e aciditetit total të lëngut të mollës Jin Nuo pas 74 ditësh ruajtjeje. Nga ana tjetër, Oshmiansky dhe Wojdylo⁶⁷nuk gjetën ndonjë ndryshim të rëndësishëm në aciditetin e lëngut të mollës kur studiuan efektin e metodave tradicionale të sqarimit.
Rezultatet e paraqitura në Tabelën 1 tregojnë se vlera e lëndëve të tretshme totale (TSS) e lëngut të mollës së trajtuar me lakazë ishte më e lartë se ajo e mostrës së patrajtuar. Këto rezultate janë në përputhje me studimet e publikuara.^{. 68}Për më tepër, Tabela 1 tregon se vlera TSS e grupit të kontrollit të lëngut të mollës ishte 9.58 në pikën fillestare kohore dhe arriti në 11.05 në fund të periudhës së ruajtjes. Këto vlera janë më të ulëta se vlerat TSS të lëngut të freskët të mollës të raportuara nga Hamid et al.^{. 69}(përkatësisht 11.2 dhe 11.80). Vlera TSS e mostrave të lëngut të mollës të trajtuara me lakazë u rrit ndjeshëm, duke filluar nga 11.23 dhe duke arritur në 12.93 pas dy javësh ruajtjeje në 4°C (Tabela 1). Një rritje e ngjashme e TSS gjatë ruajtjes u vu re edhe tek frutat agrume, limonët dhe portokallet e ëmbla. Rritja e lëndëve të ngurta totale të tretshme (TSS) gjatë ruajtjes mund të jetë për shkak të hidrolizës së polisakarideve (niseshtesë) në monosakaride (sheqerna), rritjes së përqendrimit për shkak të dehidrimit të lëngut dhe degradimit të pektinës në lëng në lëndë të ngurta të tretshme. Rritja e lëndëve të ngurta totale të tretshme (TSS) ka të ngjarë të jetë për shkak të rritjes së sheqernave të tretshme, të cilat mund të formohen nga shndërrimi i pektinës ose celulozës në sheqerna të tretshme nga pektina ose celulaza, përkatësisht, ose nga hidroliza e niseshtesë në sheqerna, siç raportohet nga Hamed et al.^69.Efekti i lakazës në vetitë e lëngut të mollës mund të vërehet vizualisht, pasi lëngu i mollës i trajtuar me lakazë shfaq rrjedhshmëri më të mirë dhe viskozitet më të ulët sesa lëngu i patrajtuar. Ky vëzhgim është regjistruar në Tabelën 1; Viskoziteti i mostrës së trajtuar me enzimë ishte 1.87 cP, ndërsa viskoziteti i mostrës së kontrollit ishte 2.95 cP. Kjo rënie e ndjeshme e viskozitetit ka të ngjarë të jetë për shkak të kapacitetit më të lartë të mbajtjes së ujit të substancave të ngjashme me pektinën dhe formimit të një strukture rrjeti koheziv.
Në këtë studim, efekti i lakazës në indeksin e nxirjes (BI) të lëngut të mollës u hetua duke matur absorbimin në 420 nm duke përdorur një spektrofotometër. Rezultatet tregohen në Tabelën 1. Gjatë ruajtjes, BI i mostrave të lëngut të mollës si në grupet e trajtuara ashtu edhe në ato të patrajtuara tregoi një tendencë graduale në rritje. BI pasqyron shkallën e nxirjes dhe mund të shërbejë si^{një i rëndësishëm}tregues i reaksioneve enzimatike dhe joenzimatike të nxirjes në ngjyrë kafe. Absorbimi u rrit ndjeshëm gjatë ruajtjes (P < 0.05). Në fund të ruajtjes,_A420Vlera e mostrave të lëngut të mollës në grupet e kontrollit dhe të trajtuara me enzima u rrit me rreth 217% dhe 121%, përkatësisht (Tabela 1). Rezultatet tregojnë se trajtimi me enzima mund ta zvogëlojë në mënyrë efektive shkallën e nxirjes me rreth 56%. Rezultatet e Bezerra et al.^[19]] janë në përputhje me rezultatet tona; Ata përdorën fibra lakkazë-glutaraldehid-kokosi për të sqaruar lëngun e mollës, duke zvogëluar ngjyrën e tij origjinale me 61%.
Edhe pse polifenolet në lëngjet e frutave kanë efekte pozitive ushqyese dhe terapeutike në trupin e njeriut, ato gjithashtu mund të reagojnë me proteinat, duke shkaktuar turbullirë, sedimentim ose turbullirë të lëngut, duke ndryshuar kështu shijen dhe aromën e produktit dhe duke zvogëluar afatin e ruajtjes së tij.⁷¹Qëllimi i këtij studimi ishte të ulte në mënyrë të sigurt përmbajtjen e komponimeve fenolike në lëngun e mollës duke përdorur lakkazë nga Pleurotus ostreatus NRC 620. Rezultatet e paraqitura në Tabelën 1 tregojnë se përmbajtja totale e komponimeve fenolike në lëngun e mollës të trajtuar me lakkazë u ul ndjeshëm para ruajtjes në 4 °C. Për më tepër, përmbajtja totale e komponimeve fenolike u ul gjithashtu gjatë ruajtjes në të dy mostrat e studiuara (Tabela 1). Hulumtimi nga Sandri et al.⁷²tregoi se lëngu i mollës i trajtuar me enzima mund të ruajë aktivitetin e tij antioksidues dhe përmbajtjen e komponimeve fenolike. Megjithatë, rezultatet e një studimi nga Lettera et al.⁷³tregojnë se trajtimi i lëngut të portokallit me lakazë kërpudhore mund të zvogëlojë përmbajtjen e komponimeve fenolike në të deri në 45%.
Komponimet fenolike kanë treguar se kanë veti të tilla si pastrimi i radikaleve të lira, reduktimi dhe shuarja e oksigjenit singlet, transferimi i atomeve të hidrogjenit dhe dhurimi i elektroneve te radikalet e lira, duke i bërë ato antioksidantë të fuqishëm.⁷⁴Prandaj, në këtë studim, metodat e bazuara në DPPH dhe FRAP u përdorën për të vlerësuar efektin e lakazës në aktivitetin antioksidues të lëngut të mollës të ruajtur në frigorifer për 14 ditë (Tabela 2). Të dyja metodat treguan një rritje të aktivitetit antioksidues gjatë ruajtjes, e cila mund të jetë për shkak të rritjes së komponimeve të lira fenolike ose formimit të produkteve të reaksionit Maillard (MRP), ku produktet e reaksionit Maillard ka të ngjarë të jenë shkaku i rritjes së aktivitetit antioksidues.⁷⁵Reaksionet joenzimatike të ngjyrës kafe (duke përfshirë degradimin e acidit askorbik, reaksionet Maillard dhe degradimin e sheqernave të katalizuara nga acidi) prodhojnë pigmente kafe (melanoidina). Produktet e ndërmjetme të degradimit të acidit askorbik dhe produktet e degradimit të sheqerit (siç janë komponimet karbonil) mund të reagojnë me aminoacidet përmes reaksioneve Maillard.⁷⁶Edhe pse nxirja e frutave dhe perimeve gjatë ruajtjes është studiuar gjerësisht, kuptimi ynë i këtyre reaksioneve mbetet i kufizuar.⁷⁷Krahasuar me metodën FRAP, lëngu i mollës i trajtuar me lakazë tregoi aktivitet antioksidues dukshëm më të ulët me metodën DPPH (Tabela 2), dhe aktiviteti antioksidues i të gjitha mostrave u rrit ndjeshëm me rritjen e kohës së ruajtjes. Në këtë studim u përdorën dy metoda të ndryshme për përcaktimin e aktivitetit antioksidues sepse parimet e tyre ndryshojnë. Metoda DPPH mat aftësinë për të neutralizuar radikalet e lira, ndërsa metoda FRAP mat aftësinë për të reduktuar jonet e hekurit. Prandaj, rekomandohet të përdoren metoda të shumta për përcaktimin e aktivitetit antioksidues për të kuptuar më mirë aktivitetin antioksidues të mostrave të studiuara.⁷⁸
Një nga gjetjet kryesore të këtij studimi është se lakaza *Pleurotus ostreatus* NRC 620 shfaq aktivitet optimal në 70°C dhe pH 3.0. Krahasuar me lakazat e tjera kërpudhore që përdoren zakonisht për sqarimin e lëngjeve, siç janë lakazat *Trametes versicolor* dhe *Ganoderma lucidum*, *P. ostreatus* NRC 620 shfaq stabilitet termik më të lartë dhe një pH më acid. Lakazat nga *Trametes versicolor* dhe *Ganoderma lucidum* zakonisht shfaqin aktivitet optimal në intervalin 50-60°C dhe në vlerat e pH midis 3.5 dhe 5.0. Ky ndryshim mund të kontribuojë në përmirësimin e efikasitetit të sqarimit të lëngjeve, veçanërisht për lëngjet acidike ku stabiliteti në vlera më të ulëta të pH është kritik. Karakteristika unike e *P. Krahasuar me lakazat e tjera kërpudhore të studiuara, *Pleurotus ostreatus* NRC 620 shfaq aftësinë për të funksionuar në mënyrë efektive në kushte më sfiduese. Temperatura e tij më e lartë e aktivitetit optimal sugjeron avantazhe të mundshme në aplikimet industriale, të tilla si shkallë më të shpejta reagimi dhe ndotje të reduktuar mikrobike. pH i tij i ulët, i cili është shumë i përshtatshëm për natyrën acidike të shumë lëngjeve, mund të jetë i dobishëm në proceset e sqarimit të lëngjeve. Këto rezultate justifikojnë eksplorime të mëtejshme për aplikim në shkallë të gjerë, duke e bërë *Pleurotus ostreatus* NRC 620 një alternativë të qëndrueshme ndaj burimeve tradicionale të lakazës kërpudhore. Krahasuar me studimet e mëparshme, zbuluam se temperatura optimale është 60°C dhe pH optimal është 3.0. Pas reagimit në 60°C për 80 minuta, lakaza *Ganoderma lucidum* mbeti.⁴⁶% e aktivitetit të saj.79 Sipas Kurniawati dhe Nicelle⁸⁰Enzimat *Ganoderma lucidum* shfaqin stabilitet të shkëlqyer deri në të moderuar në 25°C dhe vlera pH që variojnë nga 5.0 në 8.0, dhe stabilitet në pH 6.0 dhe temperatura që variojnë nga 10 në 30°C. Në këtë studim, zbuluam se pH dhe temperatura optimale për aktivitetin enzimatik për *Pleurotus ostreatus* ishin përkatësisht 3.0 dhe 70°C. Pas inkubimit në 40°C dhe 50°C për dy orë, enzima ruajti përkatësisht 68.33% dhe 59.61% të aktivitetit të saj. Për më tepër, lakaza Pleurotus ostreatus NRC 620 shfaqi aktivitet të lartë në një gamë të gjerë temperaturash nga 50°C në 80°C, duke arritur pothuajse aktivitetin maksimal (69%–98%), me aktivitet maksimal të vërejtur në 70°C.
Si përfundim, lakaza NRC620 e kërpudhës së ostrave, e marrë në kushte statike, tregoi aktivitet dhe stabilitet optimal në një gamë të gjerë kushtesh pH dhe temperature, duke demonstruar stabilitet superior krahasuar me burimet e tjera të enzimave. Shtimi i 10 mM MgSO₄ dhe CuSO₄ rriti aktivitetin enzimatik me afërsisht 21% dhe 35%, përkatësisht. Kur u përpunua në lëng molle, enzima uli pH dhe viskozitetin, ndërsa përmbajtja fenolike u ul vetëm pak gjatë ruajtjes.
Rezultatet konfirmojnë potencialin e lakazës në industrinë ushqimore, veçanërisht në sqarimin e pijeve. Duke zbërthyer në mënyrë specifike komponimet fenolike, lakaza jo vetëm që zvogëlon turbullirën dhe përmirëson qartësinë, por gjithashtu ruan cilësinë e lëngjeve të frutave në kushte të buta operimi. Ndryshe nga agjentët tradicionalë sqarues si xhelatina, bentoniti dhe xheli i silicës, lakaza nuk gjeneron mbeturina dhe nuk heq aroma të këndshme nga pijet, duke e bërë atë një opsion më miqësor ndaj mjedisit dhe të qëndrueshëm. Për më tepër, krahasuar me enzimat dhe metodat e tjera të filtrimit, lakaza ofron një zgjidhje të synuar dhe me kosto efektive pa kompromentuar cilësinë e produktit.
Kyomuhimbo, HD dhe Brink, HG. Zbatimet dhe strategjitë e imobilizimit të lakazave që përmbajnë bakër; një përmbledhje. Heliyon 9, e13156 (2023).